南京青奧於晚上8時舉行開幕式，國主席習近平和國際奧林匹克委員會主席托馬斯‧巴赫，以及出席開幕式的中外嘉賓，向「世界青年星光方陣」的各國家和地區的青年運動員表達致意。8名來自江蘇武警總隊南京支隊的儀杖兵手執五星紅旗，步入會場，南京市380名平均年齡只有15歲的青年和少年兒童組成的合唱團，演唱中華人民共和國國歌。

一名南京少女高舉着和平鴿引導牌走進場地，她的身後緊跟着各國家和地區的奧委會禮賓旗幟和運動員代表。他們代表3,808名參加南京青奧會的青年運動員。最先入場的是希臘體育代表團，主辦國中國體育代表團最後入場，其餘國家、地區，依照國際奧委會禮賓順序，先後入場。隨着習近平宣佈開幕的聲音，全場歡聲雷動，禮花漫天。吳敏霞、劉翔、任燦燦、雷聲、吳靜鈺、王勵勤、張希、邱健等八名優秀運動員代表手持奧林匹克會旗入場。

開幕儀式場面盛大，不過，近日中日關係愈趨緊張，有眼尖的網民隨即在微博說：「日本代表出來時，現場都沒聲音了！！」

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